Os LncRNAs Estão Envolvidos no Processo de Aterosclerose em Diversos Níveis / LncRNAs are Involved in the Process of Atherosclerosis at Diverse Levels

Resumo A aterosclerose é a causa mais comum de doença cardiovascular em todo o mundo, ela está associada a uma alta incidência de eventos clínicos. O acúmulo de evidências elucidou que os RNAs longos não codificantes (LncRNAs) são uma nova classe de transcritos com papéis críticos nos processos fisiopatológicos da aterosclerose. Nesta revisão, resumimos o progresso recente dos LncRNAs no desenvolvimento da aterosclerose. Descrevemos principalmente os diversos mecanismos regulatórios dos LncRNAs nos níveis transcricionais e pós-transcricionais. Este estudo pode fornecer informações úteis sobre os LncRNAs como alvos terapêuticos ou biomarcadores para o tratamento da aterosclerose.

Abstract Atherosclerosis is the most common cause of cardiovascular disease globally, associated with a high incidence of clinical events. Accumulating evidence has elucidated that long non-coding RNAs (lncRNAs) as a novel class of transcripts with critical roles in the pathophysiological processes of atherosclerosis. In this review, we summarize the recent progress of lncRNAs in the development of atherosclerosis. We mainly describe the diverse regulatory mechanisms of lncRNAs at the transcriptional and post-transcriptional levels. This study may provide helpful insights about lncRNAs as therapeutic targets or biomarkers for atherosclerosis treatment.

Candidatos a novos agentes tuberculostáticos: planejamento e sí­ntese de inibidores da fosfopanteteí­na adenililtransferase / New antituberculosis agents' candidates: design and synthesis of phosphopantetheine adenylyltransferase inhibitors

A tuberculose (TB) é uma das maiores causas de morte por infecção no mundo, sendo que, em 2015, registraram-se 10,4 milhões de novos casos. O agente etiológico da doença, o Mycobacterium tuberculosis (Mtb), apresenta altos níveis de resistência frente aos quimioterápicos disponíveis para o tratamento da TB. Além disso, a terapia atual da doença explora poucos alvos essenciais ao Mtb. Neste sentido, explorar novos alvos, essenciais ao crescimento e sobrevivência da micobactéria é de grande interesse e poderia gerar fármacos mais efetivos, eficazes contra cepas resistentes e a forma latente da TB. Para este fim, o presente trabalho propôs o desenvolvimento de inibidores da enzima fosfopanteteína adenililtransferase (PPAT), a qual possui caráter regulatório na via de biossíntese da Coenzima A (CoA) da micobactéria. Inicialmente, propuseram-se 50 estruturas de potenciais inibidores da PPAT de M. tuberculosis (MtPPAT), baseando-se na estrutura de seu substrato, a fosfopanteteína, e na estrutura do sítio ativo da enzima. Em seguida, propuseram-se outros 28 ligantes. A fim de se prever as potenciais complementaridades entre os 78 inibidores propostos e o sítio ativo da MtPPAT, empregou-se a estratégia de docking. Posteriormente, realizaram-se cálculos semi-empíricos, com os complexos dos ligantes que se mostraram mais interessantes nas simulações de docking, a fim de se obter informações sobre a entalpia de interação dos ligantes com o sítio ativo da MtPPAT. A partir dos resultados obtidos nos estudos computacionais, selecionaram-se os inibidores que se mostraram mais promissores. A síntese destes ligantes e a de seus fragmentos foi realizada. Avaliaram-se a atividade microbiológica in vitro, bem como a citotoxicidade dos ligantes sintetizados. Alguns dos compostos sintetizados apresentaram atividade frente às cepas sensíveis e resistentes do Mtb na casa de micromolar. Todos os compostos ativos não foram considerados citotóxicos. A fim de validar o planejamento e o alvo dos possíveis inibidores, verificando a atividade inibitória desses frente à enzima MtPPAT, realizou-se a produção e purificação da enzima. Por fim, realizaram-se ensaios de inibição enzimática frente à MtPPAT, os quais permitiram a identificação dos primeiros inibidores da enzima já descritos, com atividade na casa de micromolar, validando-se o alvo em questão

Tuberculosis is one of the major causes of death by infection worldwide. In 2015, 10.4 thousand new cases of the disease were registered. The tuberculosis' causing agent Mycobacterium tuberculosis presents high levels of resistance for the available chemotherapy. Thereof, exploit new M. tuberculosis targets is of utmost importance to overcome drug resistant tuberculosis. In this sense, the enzyme phosphopantetheine adenylyltransferase (PPAT) generates scientific interest since it displays a regulatory role in the M. tuberculosis coenzyme A (CoA) biosynthesis. Therefore, the purpose of the present study was the development of M. tuberculosis PPAT (MtPPAT) inhibitors. Initially, 50 potentially MtPPAT inhibitors were designed based on MtPPAT's substrate and the enzyme's active site. After preliminary results, more 28 compounds were designed. Docking simulations were performed with the 78 compounds synthesized, leading to the prediction of the interaction between the proposed inhibitors and MtPPAT active site. Latelly, semi-empirical calculations were performed with the most promising compounds. These calculations were carried out to obtain information about the enthalpy interactions between compounds and MtPPAT active site. Computational studies led to the selection of the most promising inhibitors. Those compounds and some of their fragments were synthesized, purified, and characterized. The synthesized compounds had their in vitro microbiological activity and cytotoxicity evaluated. Some of the synthesized compounds showed activity against the Mtb sensitive and resistant strains in micromolar range. Besides that, the active compounds were not considered cytotoxic. To validate the potential inhibitors' design and evaluate their capacity to inhibit MtPPAT, the enzyme was produced and purified. MtPPAT inhibitory assays were performed, leading to the first inhibitors of the enzyme, with activity in micromolar range, validating the target

Efeito de inibidores da atividade proteolítica na resistência de união de pino de fibra de vidro à dentina radicular após 12 meses / Effect of proteolytic activity inhibitors on bond strength of glass-fiber post to radicular dentin up to 12 months

O estabelecimento de uma camada híbrida adequada no canal radicular representa um dos principais desafios clínicos devido à dificuldade de acesso. Dessa forma, o uso de inibidores proteolíticos poderia tornar-se um recurso favorável. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de inibidores proteolíticos na união de pino de fibra de vidro fixado com cimento adesivo, considerando os terços radiculares e tempos distintos, por meio da resistência de união (RU). Cento e quarenta e quatro raízes bovinas foram selecionadas e divididas em 6 grupos de tratamento, e redivididas em 3 subgrupos de acordo com os tempos de avaliação de 24 horas, 6 e 12 meses (n=8). Após o tratamento endodôntico e desobturação padronizados, as raízes foram cimentadas com pinos de fibra de vidro cônicos (Exacto/Angelus). As raízes foram tratadas com sistema adesivo convencional de três passos, Adper Scotchbond Multipurpose/ 3M ESPE (SBMP) e cimento dual RelyX ARC/ 3M ESPE. Após prévia divisão, foram alocadas em grupos CN (Controle Negativo- sem pré tratamento associado), CP (Controle Positivo- com agentes ativador e catalisador), EDTA (ácido etilenodiamino tetra-acético a 17%), CHX (digluconato de clorexidina a 2%), E-5 (E- 64 a 5 µM) e E-10 (E-64 a 10 µM). Após 24 horas, as raízes foram seccionadas perpendicularmente ao longo eixo e identificadas quanto à região, obtendo-se fatias de 1 mm de espessura (cervical, médio e apical), que foram armazenadas em saliva artificial para serem testadas. Todas as fatias foram submetidas ao teste de extrusão (push-out) na máquina de teste universal (Instron) com célula de carga de 50 N a 0,5 mm/min. Os dados foram analisados pelo teste de ANOVA a três critérios e comparações múltiplas com Tukey, ambos com p<0,05. Após 24 horas, não se observou diferenças entre os tratamentos. Após 6 meses, a CHX demonstrou melhor desempenho, cujo efeito não se prorrogou até os 12 meses. O uso de inibidores proteolíticos não foram capazes de preservar a resistência de união dos pinos intrarradiculares até o tempo de 12 meses.(AU)

The adequate establishment of hybrid layer in the root canal on bonding process is still a clinical challenge due to its hard access. Thus, the use of proteolytic inhibitors could become a favorable tool. The aim of this study was to evaluate the effect of proteolytic inhibitors in the bonding of a glass- fiber post fixed with a luting cement, regarding the root thirds and different times through the bond strength. One hundred and forty four bovine roots were selected and divided into 6 treatment groups, and subdivided according to the time of evaluation of 24 hours, 6 and 12 months (n=8). After endodontic treatment and standardized removal procedure, the roots were cemented with tapered glass fiber posts (Exacto/ Angelus). The roots were treated with three-step etch-and-rinse adhesive system Adper Scotchbond Multipurpose/ 3M ESPE (SBMP) and dual cement RelyX ARC/ 3M ESPE. After previous division, CN (negative- control without pre associated treatment), CP (Control positive- with activator and catalyst agents) EDTA (17% ethylenediaminetetraacetic acid) CHX (2% chlorhexidine digluconate) E-5 (5µM E-64) and E-10 (10µM E-64). After 24h, the roots were sectioned perpendicular to the long axis and identified according to third in 1mm thick slices (cervical, middle and apical), which were stored in artificial saliva to be tested. All slices were subjected to extrusion tests (push-out) in the universal test machine (Instron) at 50 N load cell at 0.5 mm/min. Data were analyzed with three-way ANOVA and multiple comparisons with Tukey test, both with p <0.05. After 24 hours, no differences were observed between treatments. After 6 months, CHX showed better performance, which did not last up 12 months. The proteolytic inhibitors performed differently in the bonding process over time; only CHX promoted inhibition at 6 months. The use of proteolytic inhibitors were not able to maintain the bond strength of intraradicular posts up time of 12 months.(AU)

Uso crônico de inibidores da bomba de prótons na atenção primária / Chronic use of proton pump inhibitors in primary health care

Introdução: Os inibidores da bomba de prótons (IBPs) são considerados o maior avanço no tratamento de doenças gástricas. No entanto, atualmente têm sido utilizados, muitas vezes, de modo empírico (por prescrição ou automedicação). Objetivo: O presente estudo teve por objetivo avaliar o perfil dos pacientes adultos que consultam na atenção primária e que fazem uso continuado de IBPs. Métodos: O estudo foi retrospectivo, com delineamento transversal, de base populacional, analítico-descritivo, realizado no município de Água Doce, região meio-oeste de Santa Catarina. Possui 7.550 habitantes e conta com duas Estratégias Saúde da Família (ESF) que abrangem 100% do território do município e de sua população. A amostra para o estudo foi composta por todos os pacientes maiores de 18 anos que, no período de maio a agosto de 2013, obtiveram receita médica contendo um inibidor da bomba de prótons em caráter contínuo. Resultados: Foram realizadas 1.321 consultas médicas nas quais 109 prescrições continham inibidor da bomba de prótons em caráter contínuo (8,25% da população atendida). As mulheres representaram 73,4% da amostra (n= 80). A faixa etária predominante foi a compreendida entre os 51 aos 70 anos (67,5%; n= 54). O inibidor de bomba prescrito em 108 pacientes foi o omeprazol. Destes, 71 pacientes já haviam realizado endoscopia, tendo 61,9% (n= 44) ocorrido num período de até 4 anos. Dentre aqueles que utilizavam irregular mente o IBP (n= 36), 75% o fazia quando apresentava sintomas (n= 25); 13,89% usava em dias alternados (n= 5) e 11,1% (n = 4) ingeria mais do que dois comprimidos ao dia no caso de os sintomas não cessarem com um comprimido. Aumentos posológicos realizados pelo paciente sem prescrição médica ocorreram em 27,52% (n= 30). Conclusões: O presente estudo encontrou resultados alarmantes frente às irregularidades posológicas observadas. É preciso implantar estratégias para educação desta população, com o intuito de promover a desmedicalização precoce e evitar a banalização do uso de inibidores de bomba de prótons.

Introduction: Proton pump inhibitors (PPIs) are considered the greatest advance in the treatment of gastric diseases. However, they currently have been used empirically (by prescription or self-medication). Objective: The present study aimed to evaluate the profile of adult patients who consult in primary care and make continued use of PPIs. Methods: It is a retrospective, cross-sectional, population-based, analytical- descriptive study performed in the municipality of Água Doce, middle west region of Santa Catarina state. It has 7.550 inhabitants and has two Family Health Strategy (FHS) covering 100 % of the municipality and its population. The sample consisted of all patients older than 18 years, in the period May-August 2013, whose obtained a continuous PPI prescription. Results: 1.321 medical consultations were conducted and 109 had a continuous PPI prescription (8.25% of population consulted). Women accounted for 73.4% of the sample (n= 80). The predominant age group was between 51 to 70 years (67.5%, n= 54). The PPI prescribed in 108 patients was omeprazole. Of these, 71 patients had undergone endoscopy, and 61.9 % (n= 44) were in the period of up to 4 years. Among those who improperly intaked the PPI (n = 36), 75% did so when presented with symptoms (n= 25), 13.89% used on alternate days (n= 5), 11.1% (n= 4) took it more than two tablets per day if symptoms are not stopped with one tablet. Dose increases made by the patient without prescription occurred in 27.52% (n= 30). Conclusions: This study found alarming results, based on the dosing irregularities observed. There is a need to deploy strategies for education of this population, in order to promote early unmedicalization and avoid trivializing the use of proton pump inhibitors.

Terapia com inibidor da ECA com dosagens relativamente altas e risco de agravamento renal na insuficiência cardíaca crônica / ACE-inhibitor therapy at relatively high doses and risk of renal worsening in chronic heart failure

FUNDAMENTO: O efeito renoprotetor dos inibidores da ECA vem sendo questionado no caso de diminuição do volume circulante efetivo, como na insuficiência cardíaca crônica direita ou biventricular. Objetivo: Detectar os preditores clínicos de agravamento renal na população de pacientes com ICC, caracterizado por dois tipos de regime de dosagem de inibidores da ECA. MÉTODOS: De acordo com um desenho de coorte retrospectiva, seguimos dois grupos de pacientes com ICC - tanto direita quanto biventricular -, todos na classe III da NYHA, tratados com inibidores da ECA (enalapril ou lisinopril), e com fração de ejeção do ventrículo esquerdo (FEVE) < 50 por cento, por meio de distinção em sua dosagem de inibidor da ECA: média-baixa (< 10 mg por dia) ou dosagem "alta" (> 10 mg por dia) de enalapril ou lisinopril. A disfunção renal agravada (ARD) foi definida pelo aumento de Cr > 30 por cento com relação ao segmento basal. O modelo de risco proporcional de Cox foi utilizado para identificar os preditores da ARD entre as seguintes variáveis: os inibidores da ECA com "alta" dosagem, idade, FEVE basal, histórico de repetidas terapias intensivas com diuréticos de alça por via intravenosa (diurético intravenoso), diabete, Cr basal, histórico de hipertensão, pressão arterial sistólica < 100 mmHg. RESULTADOS: Cinquenta e sete pacientes foram recrutados, dos quais 15 foram tratados com inibidor da ECA com dosagem "alta". Durante um seguimento médio de 718 dias, a ARD ocorreu em 17 pacientes (29,8 por cento). Apenas o inibidor da ECA com "alta" dosagem (RR: 12,4681 IC: 2,1614 - 71,9239 p = 0,0050) e Cr basal (RR:1,2344 IC: 1,0414 - 1,4632 p = 0,0157) foi demonstrado ser preditor da ARD. Além disso, demonstrou-se que o inibidor da ECA com dosagens "altas" não previu ARD em ICC sem diurético intravenoso e ICC com diabete. CONCLUSÃO: Na ICC de classe III da NYHA, o inibidor da ECA com "altas" dosagens e um maior Cr basal foi preditor da ARD. A nefrotoxicidade relacionada com inibidores da ECA em "altas" dosagens foi aumentada com o diurético intravenoso, ao passo que, em pacientes com ICC com diabete, aquela não foi detectada.

BACKGROUND: Renoprotective effect of ACE-inhibitors has been questioned in case of decreased effective circulating volume, like in right or biventricular chronic heart failure. OBJECTIVE: To detect clinical predictors of renal worsening in CHF patient population characterized by two types of ACE-inhibitor dosing regimens. METHODS: According to a retrospective cohort design, we followed 2 groups of patients with CHF - whether right or biventricular -, all in III NYHA class treated with ACE-inhibitors (enalapril or lisinopril), and with left ventricular ejection fraction (LVEF) < 50 percent, by distinguishing them by ACE-inhibitor dosing: average-low (<10 mg per day) or "high" dose (>10 mg per day) of enalapril or lisinopril. Worsened renal failure (ARD) was defined by Cr increase >30 percent from baseline. Cox proportional hazards model was used to identify the predictors of ARD among the following variables: ACE-inhibitors "high" dose, age, basal LVEF, history of repeated intensive intravenous loop diuretic therapies (IV diur), diabetes, basal Cr, history of hypertension, systolic blood pressure < 100 mm Hg. RESULTS: 57 patients were recruited, of whom 15 were treated with ACE-inhibitor "high" dose. During a mean follow-up of 718 days, ARD occurred in 17 (29.8 percent) patients. Only ACE-inhibitor "high" dose (HR: 12.4681 C.I.: 2.1614-71.9239 p=0.0050) and basal Cr (HR: 1.2344 C.I.: 1.0414-1.4632 p=0.0157) were shown to predict ARD. Moreover, ACE-inhibitor "high" doses were shown to fail to predict ARD in both CHF without IV diur and CHF with diabetes. CONCLUSION: In III NYHA class CHF, ACE-inhibitor "high" doses and a higher basal Cr predicted ARD. Nephrotoxicity related to ACE-inhibitor "high" doses was increased by IV diur, whereas it was not detected in CHF patients with diabetes.

Efeito do óxido nítrico no transporte mucociliar / Effects of nitric oxide in mucociliary transport

As vias aéreas, constituídas por epitélio ciliado e secretor de muco, promovem ao trato respiratório mecanismo de defesa que livra esta superfície das partículas inaladas durante a respiração. É de fundamental importância o entendimento da fisiologia e dos mecanismos envolvidos com a atividade mucociliar. A literatura sugere que o NO, em especial o produzido pela expressão da iNOS, mantém a função mucociliar e a defesa imune da cavidade nasal. Objetivo: Avaliar o envolvimento do NO e das vias enzimáticas da produção do NO no transporte mucociliar, utilizando inibidores da NO sintase constitutiva e indutiva, L-NAME e aminoguanidina, respectivamente. Materiais e métodos: Preparações de palatos de rã foram imersos em soluções de ringer (controle), L-NAME ou aminoguanidina. Os palatos foram imersos nestas soluções por quatro períodos de 15 minutos. Medidas da velocidade do transporte mucociliar foram feitas antes e após cada exposição. Resultos: Palatos controles mantiveram estável a velocidade do transporte. O L-NAME aumentou, enquanto a aminoguanidina reduziu a velocidade de transporte do muco. Conclusão: O bloqueio inespecífico da cNOS com L-NAME e bloqueio relativamente específico da iNOS com aminoguanidina permitiu propor que dependendo da via o NO pode aumentar ou diminuir o transporte mucociliar em palatos de rã.

The airways are made up of ciliated epithelium which secretes mucous, protecting the respiratory tract from particles inhaled during breathing. Its is paramount to understand the physiology and the mechanisms involved in mucociliary activity. Literature suggests that Nitric oxide (NO), especially the one produced by iNOS expression, maintains the mucociliary function and the immune defense of the nasal cavity. AIM: to assess NO participation and the enzymatic pathways in the production of NO and mucociliary transport, using constructive and inductive NO synthetase inhibitors, L-NAME and aminoguanidine, respectively. Materials and methods: frog palates were prepared and immerse in ringer (control), L-NAME or aminoguanidine solutions. The palates were immerse in these solutions for four periods of 15 minutes. Mucociliary transport measures were carried out before and after each exposure. Results: control palates maintained stable their transportation speed. L-NAME increased, while aminoguanidine reduced mucous transportation velocity. Conclusion: unspecific cNOS block with L-NAME and relatively specific iNOS block with aminoguanidine results leads us to propose that depending on the pathway, the NO can increase or reduce mucociliary transport in frog palates.